在單細胞轉錄組測序實驗操作中,很多都是需要從各種生物樣本細胞中制備細胞懸液;而針對不同的生物樣本類型,如何獲取到活性高、完整性好、結團率低的單細胞懸液,這是單細胞實驗成功的關鍵。那對于小鼠肝腎脾樣品的細胞懸液實驗操作該如何進行呢?
實驗設備:單細胞懸液制備儀 JX-CKSM-48WK
小鼠肝腎脾樣品的細胞懸液制備實驗過程:
1.打開儀器開關,打開加熱模塊,加熱
2.取活體組織后,放入PBS液中去紅,然后取20-50mg,分成6-8等分
3.用移液器把消化酶加入2ml的研磨套裝管中,將加滿消化酶的離心管放入預熱模塊中預熱3-5分鐘
4.將處理好的組織用鑷子轉移到加滿消化酶的離心管中
5.將裝有消化酶和組織的離心管放置到加熱板中,選擇25分鐘程序,開始運行
6.程序結束取出離心管,將消化好的組織液轉移到過濾管中,即得到一管單細胞懸液
小鼠肝腎脾樣品細胞懸液制備實驗前后對比效果圖:
樣品懸液制備的實驗注意事項
1、消化酶和終止液均需要在冷凍環(huán)境下保存。
2、消化酶解凍時需在常溫條件下解凍,不可以放入水浴或者其他加熱儀器中解凍,溫度升高對酶的活性會有很大的影響。
從新鮮組織中制備高活性和高質量的單細胞懸液是單細胞轉錄組測序至關重要的一步,很多單細胞實驗折戟在此。常見的問題諸如細胞活性低,細胞背景不干凈,細胞碎片多,細胞結團率高等??蒲姓邌渭毎麘乙褐苽鋬x具有組織高利用率、單細胞化過程高效、細胞活性高的特點,常應用于流式細胞術/單細胞測序/原代細胞培養(yǎng)等實驗。